產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

　內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見(jiàn)的污染物，由于真核細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感，因此，如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會(huì)大大降低真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單、快捷、高效提取無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法，提取的質(zhì)粒最大限度去除內(nèi)毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。

　　本試劑盒適合提取5-15ml菌液，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上通過(guò)新型硅基質(zhì)膜高效專(zhuān)一的結(jié)合質(zhì)粒DNA，每個(gè)吸附柱最高可吸附100 μg的質(zhì)粒DNA，同時(shí)采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內(nèi)毒素過(guò)濾柱，有效去除內(nèi)毒素、蛋白等雜質(zhì)。由本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、質(zhì)量穩(wěn)定，特別適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，同時(shí)也可用于DNA測(cè)序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品名稱(chēng)：康為世紀(jì) 無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA中提試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：CW2105S

產(chǎn)品組分：

額外試劑需求：無(wú)水乙醇、異丙醇。

使用注意：

1．所有組分可在干燥、室溫（15-30℃）環(huán)境穩(wěn)定保存1年，更長(zhǎng)時(shí)間保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩(wěn)定保存6個(gè)月。

2．第一次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時(shí)間，恢復(fù)至室溫后使用。

3．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer PW中加入無(wú)水乙醇。

4．使用前請(qǐng)先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀，如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

5．注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。

6．提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類(lèi)、質(zhì)粒大小、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。

相關(guān)知識(shí)：

細(xì)菌的收獲可通過(guò)離心來(lái)進(jìn)行， 而細(xì)菌的裂解則可以采用多種方法中的任意一種， 這些方法包括用非離子型或離子型去污劑、 有機(jī)溶劑或堿進(jìn)行處理及用加熱處理等。 選擇哪一種方法取決于３個(gè)因素：質(zhì)粒的大小、小腸桿菌菌株及裂解后用于純化質(zhì)粒 DNA 的技術(shù)。

1)大質(zhì)粒 (大于 15kb) 容易受損， 故應(yīng)采用漫和裂解法從細(xì)胞中釋放出來(lái)。 將細(xì)菌懸于蔗糖等滲溶液中，然后用溶菌酶和 EDTA 進(jìn)生處理，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞外膜，再加入 SDS 一類(lèi)去污劑溶解球形體。 這種方法最大限度地減小了從具有正壓的細(xì)菌部把質(zhì)粒釋放出來(lái)所需要的作用力。

2)可用更劇烈的方法來(lái)分離小質(zhì)粒。在加入 EDTA 后，有時(shí)還在加入溶菌酶后讓細(xì)菌

暴露于去污劑， 通過(guò)煮沸或堿處理使之裂解。 這些處理可破壞堿基配對(duì)， 故可使宿主的線(xiàn)狀染色體 DNA 變性，但閉環(huán)質(zhì)粒 DNA 鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開(kāi)。當(dāng)條件恢復(fù)正常時(shí)，質(zhì)粒 DNA 鏈迅速得到準(zhǔn)確配置，重新形成*天然的超螺旋分子。

3)一些大腸桿菌菌株 (如 HB101 的一些變種衍生株 ) 用去污劑或加熱裂解時(shí)可釋放相對(duì)大量的糖類(lèi)， 當(dāng)隨后用氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心進(jìn)行質(zhì)粒純化時(shí)它們會(huì)惹出麻煩。 糖類(lèi)會(huì)在梯度中緊靠超螺旋質(zhì)粒 DNA 所占位置形成一致密的、模糊的區(qū)帶。因此很難避免質(zhì)粒 DNA 內(nèi)污染有糖類(lèi)，而糖類(lèi)可抑制多種限制酶的活性。 故從諸 如 HB101 和 TG1 等大腸桿菌蓖株中大量制備質(zhì)粒時(shí)，不宜使用煮沸法。

4)當(dāng)從表達(dá)內(nèi)切核酸酶 A 的大腸桿菌菌株 (endA+ 株，如 HB101) 中小量制備質(zhì)粒時(shí)，建議不使用煮沸法。 因?yàn)橹蠓胁荒?滅活內(nèi)切核酸酶 A，以后在溫育 (如用限制酶消化 )時(shí)，質(zhì)粒 DNA 會(huì)被降解。但如果通過(guò)一個(gè)附加步驟 (用酚：氯仿進(jìn)行抽提 )可以避免此問(wèn)題。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

室溫 (15-30℃)

產(chǎn)品名稱(chēng)：康為世紀(jì) 無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA中提試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：CW2105S

產(chǎn)品訂購(gòu)信息  

品牌               貨號(hào)                         名稱(chēng)               規(guī)格

康為世紀(jì)    CW2105S     無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒  50 preps

關(guān)于公司：

康為世紀(jì)生物科技股份有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域，有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的國(guó)家優(yōu)良企業(yè)，主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn)，為生命科學(xué)研究、基因檢測(cè)和體外診斷用戶(hù)提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)。產(chǎn)品線(xiàn)主要包括分子診斷原料酶、核酸采集與保護(hù)劑、核酸提取、分子診斷檢測(cè)試劑等，打破了中國(guó)生物研究與產(chǎn)業(yè)對(duì)進(jìn)口試劑的依賴(lài)。

紅榮微再——助理分子診斷新未來(lái)

紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專(zhuān)業(yè)供應(yīng)商，以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶(hù)提供質(zhì)量可靠、貨美價(jià)優(yōu)的分子診斷試劑耗材，與客戶(hù)攜手為中國(guó)分子診斷的發(fā)展而前行。